2 × ಟಕ್ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್

ಅಲ್ಟ್ರಾ-ಪ್ಯೂರ್ ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಹೈ-ಫಿಡೆಲಿಟಿ ಥರ್ಮೋಸ್ಟೇಬಲ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್.

ಟಕ್ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಒಂದು ರಾಸಾಯನಿಕ-ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಹಾಟ್ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟಕ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ 3′-5 ′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು 5′-3 ′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ತಕ್ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ನಿರ್ಬಂಧಿಸಲಾಗಿದೆ. 5-10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 94 ° C ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿದ ನಂತರ ಮಾತ್ರ ಅದರ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು, ಹೀಗಾಗಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಆರಂಭಿಕ ಚಕ್ರದ ಮೊದಲು ಪ್ರೈಮರ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಎನಿಲಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಪ್ರೈಮರ್ ಡೈಮರ್‌ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ. ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಟಾಕ್ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಷ್ಠೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಪಿಫು ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗೆ ಎರಡನೆಯದು. ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೀಕರಣದ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ವೇಗವು ಪಿಎಫ್‌ಯು ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗಿಂತ ವೇಗವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯು ಅಧಿಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ.

ಬೆಕ್ಕು ಇಲ್ಲ	ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಗಾತ್ರ
4992789	5x1 ಮಿಲಿ
4992790	5 × 1 ಮಿಲಿ

ನಮಗೆ ಇಮೇಲ್ ಕಳುಹಿಸಿ

ಉತ್ಪನ್ನ ವಿವರ

ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಉದಾಹರಣೆ

FAQ

ಉತ್ಪನ್ನ ಟ್ಯಾಗ್‌ಗಳು

ಚಟುವಟಿಕೆಯ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ

1 ಯುನಿಟ್ (ಯು) ಟಕ್ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು 10 ನಿಮಿಷದೊಳಗೆ 10 ಎನ್ಮೋಲ್ ಡಿಯೋಕ್ಸಿನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಆಸಿಡ್-ಕರಗದ ಪದಾರ್ಥಗಳೊಳಗೆ ಸೇರಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ

SDS-PAGE ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯಿಂದ ಶುದ್ಧತೆಯು 99%ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು; ಹೊರಗಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನ ಯಾವುದೇ ಚಟುವಟಿಕೆ ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ; ಮಾನವ ಜೀನೋಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಿಂಗಲ್-ಕಾಪಿ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ವರ್ಧಿಸಬಹುದು; ಒಂದು ವಾರದವರೆಗೆ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದಾಗ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಬದಲಾವಣೆಯಿಲ್ಲ.

ಮುಖ್ಯ ತಾಂತ್ರಿಕ ನಿಯತಾಂಕಗಳು

ಇದು 5′-3 ′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು 3′-5 ′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಮತ್ತು ಇದರ ನಿಷ್ಠೆಯು Pfu ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿದೆ. ತಕ್ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ವೇಗವು Pfu ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗಿಂತ ವೇಗವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯು ಅಧಿಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಮೊಂಡಾದ ತುದಿಗೆ ಜೋಡಿಸಬಹುದು ಅಥವಾ ಟಿಎ ವೆಕ್ಟರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಕ್ಲೋನ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬೇಕಾದರೆ, TA ವೆಕ್ಟರ್‌ಗೆ ಕ್ಲೋನಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಮೊದಲು ಮೊದಲು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ಮತ್ತು 3'-dA ಓವರ್‌ಹ್ಯಾಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಒನ್-ಟ್ಯೂಬ್ ಟಕ್ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಕ್ಸ್ (ರಾಷ್ಟ್ರೀಯ ಹೈಟೆಕ್ ಉತ್ಪನ್ನ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ)

Q ಟಕ್ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಕ್ಸ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಿದೆ ಮತ್ತು ಸಂಕೀರ್ಣವಾದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಜಿಸಿ ವಿಷಯ, ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಮುಂತಾದವುಗಳೊಂದಿಗೆ ವರ್ಧಿಸಬಹುದು. ಉದ್ದೇಶಿತ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ 2 ಪ್ರತಿಗಳಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ವರ್ಧಿಸಬಹುದು, ಹೆಚ್ಚು ನಿಖರವಾದ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಖಾತ್ರಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ.

Ta ಅನನ್ಯ ತಕ್ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಕ್ಸ್ ಸೂತ್ರವು ಇಡೀ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಅತ್ಯಂತ ಸ್ಥಿರವಾಗಿಸುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಥಾ ಅಥವಾ ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಶೇಖರಣೆಯಿಂದ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ.

Stable ಸ್ಥಿರ ಮತ್ತು ದಕ್ಷ ಪೂರ್ವ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಶ್ರಿತ ಪರಿಹಾರವು ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯನ್ನು ವೇಗವಾಗಿ ಮತ್ತು ಸರಳವಾಗಿಸಬಹುದು, ಕಾರ್ಮಿಕ ತೀವ್ರತೆ ಮತ್ತು ಮಾದರಿ ದೋಷವನ್ನು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಉನ್ನತ-ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧಕ ಮತ್ತು ಆಪ್ಟಿಮೈಜರ್ ಅನ್ನು ಸಹ ಮಿಶ್ರಣದಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಗತ್ಯತೆಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

■ ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಬಣ್ಣ-ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಮತ್ತು ಬಣ್ಣರಹಿತ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಡೈ ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಕ್ಸ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಪಿಸಿಆರ್ ನಂತರ ನೇರವಾಗಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರ್ಸ್ ಮಾಡಬಹುದು, ಲೋಡಿಂಗ್ ಬಫರ್ ಸೇರಿಸದೆಯೇ.

ಅರ್ಜಿಗಳನ್ನು

ಇದು ಜೀನೋಮ್‌ಗಳಂತಹ ಸಂಕೀರ್ಣ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಿಂದ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಷ್ಠೆ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು Pfu ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಜೀನ್‌ಗಳ ಕ್ಲೋನಿಂಗ್, ಸೈಟ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಮತ್ತು ಏಕ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಪಾಲಿಮಾರ್ಫಿಸಂ (SNP) ಇತ್ಯಾದಿಗಳ ಕ್ಲೋನಿಂಗ್‌ನಂತಹ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳಿಗೆ ಇದು ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸದಲ್ಲಿ ಮುನ್ನೆಚ್ಚರಿಕೆಗಳು:

ಪ್ರೈಮರ್ ಉದ್ದವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 20-25 ಮೆರ್ ಆಗಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ದೀರ್ಘ ತುಣುಕು ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ, ಪ್ರೈಮರ್ ಉದ್ದವನ್ನು 30-35 ಮೆರ್‌ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಬೇಕು.

Pri ಎರಡು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ನಡುವೆ ಯಾವುದೇ ಪೂರಕ ಜೋಡಣೆ ಇಲ್ಲ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ 3. ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಕೊನೆಯ 3 ಬೇಸ್‌ಗಳಿಗೆ.

■ ಜಿಸಿ ವಿಷಯವು 50-60%ಆಗಿರಬೇಕು ಮತ್ತು ಸ್ಥಳೀಯ ಶ್ರೀಮಂತ ಜಿಸಿ ಅಥವಾ ಎಟಿಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ. ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಸ್ಥಿರವಾಗಿ ಜೋಡಿಸಲು, 3 ′ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಶ್ರೀಮಂತ ರಚನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.

ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.

M ಪರಸ್ಪರ ಹತ್ತಿರವಿರುವ Tm ತಾಪಮಾನದೊಂದಿಗೆ ಎರಡು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿ.

ಪಿಸಿಆರ್‌ಗಾಗಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಟಿಎಮ್ ಮೌಲ್ಯದ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ:

Mer ಪ್ರೈಮರ್ 20 ಮೆರ್ ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಇದ್ದಾಗ: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).

Mer ಪ್ರೈಮರ್ 20 ಮೆರ್ ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿದ್ದಾಗ: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, ಅಲ್ಲಿ L ಎಂಬುದು ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಉದ್ದವಾಗಿದೆ.

Ne ಅನೀಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು (Tm-5) ° C ಗೆ ಹೊಂದಿಸಿ.

ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಇನ್ಪುಟ್

ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಸೂಕ್ತ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 0.1 μM ಮತ್ತು 1.0 .M ನಡುವೆ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಬಹುದು. ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ವರ್ಧನೆಯ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಕಡಿಮೆ ಇಳುವರಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವು ದೊಡ್ಡದಾದಾಗ ಅಥವಾ ಸಂಕೀರ್ಣವಾದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎ (ಮಾನವ ಜೀನೋಮ್ ಡಿಎನ್‌ಎ) ಯನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಬಳಸಿದಾಗ, ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಕಡಿಮೆಯಾಗಿರಬೇಕು. ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪ್ರಮಾಣವು ಚಿಕ್ಕದಾದ ಅಥವಾ ಸರಳವಾದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್ಎ (ಉದಾ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಡಿಎನ್ಎ, ಇತ್ಯಾದಿ) ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿದಾಗ, ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಹೆಚ್ಚಿರಬೇಕು.

ಎಲ್ಲಾ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ODM/OEM ಗಾಗಿ ಕಸ್ಟಮೈಸ್ ಮಾಡಬಹುದು. ವಿವರಗಳಿಗಾಗಿ,ದಯವಿಟ್ಟು ಕಸ್ಟಮೈಸ್ಡ್ ಸೇವೆ (ODM/OEM) ಕ್ಲಿಕ್ ಮಾಡಿ

ಹಿಂದಿನದು: 2 × ಹಾಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟಕ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್

ಮುಂದೆ: 2 × ಟಕ್ ಪ್ಲಸ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್

1 kb ತುಣುಕನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿ. PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಂತರ, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ 5 μl ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ.

ಪ್ರ: ಯಾವುದೇ ವರ್ಧಕ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳಿಲ್ಲ

A-1 ಟೆಂಪ್ಲೇಟು

Temp ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ಅಥವಾ ಟಕ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇತ್ಯಾದಿ ——— DNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿ, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಅಥವಾ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಿಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯಿರಿ.

Temp ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಪೂರ್ಣಗೊಂಡಿಲ್ಲ -— ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ ಮತ್ತು ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಸಮಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ.

Mp ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅವನತಿ —— ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಪುನಃ ತಯಾರಿಸಿ.

ಎ -2 ಪ್ರೈಮರ್

Pri ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಕಳಪೆ ಗುಣಮಟ್ಟ —— ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಪುನಃ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಿ.

Mer ಪ್ರೈಮರ್ ಅವನತಿ —— ಸಂರಕ್ಷಣೆಗಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಸಣ್ಣ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಿ. ಬಹು ಘನೀಕರಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಕರಗುವಿಕೆ ಅಥವಾ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ 4 ° C ಕ್ರಯೋಪ್ರೆಸರ್ವ್ ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.

Pri ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಅಸಮರ್ಪಕ ವಿನ್ಯಾಸ (ಉದಾ. ಪ್ರೈಮರ್ ಉದ್ದವು ಸಾಕಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ನಡುವೆ ಡೈಮರ್ ರೂಪುಗೊಂಡಿದೆ, ಇತ್ಯಾದಿ) -ಮರುವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು (ಪ್ರೈಮರ್ ಡೈಮರ್ ಮತ್ತು ಸೆಕೆಂಡರಿ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ ರಚನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ)

A-3 Mg²⁺ಏಕಾಗ್ರತೆ

ಎಂಜಿ²⁺ ಏಕಾಗ್ರತೆ ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆ —— Mg ಅನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ²⁺ಏಕಾಗ್ರತೆ: Mg ಅನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಿ²⁺ ಸೂಕ್ತ ಎಮ್‌ಜಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲು 0.5 ಎಂಎಂ ಮಧ್ಯಂತರದೊಂದಿಗೆ 1 ಎಮ್‌ಎಮ್‌ನಿಂದ 3 ಎಂಎಮ್‌ವರೆಗಿನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸರಣಿಯಿಂದ ಏಕಾಗ್ರತೆ²⁺ ಪ್ರತಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗೆ ಏಕಾಗ್ರತೆ.

ಎ -4 ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ

An ಹೆಚ್ಚಿನ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಬಂಧನದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. -— ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 2 ° C ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಉತ್ತಮಗೊಳಿಸಿ.

ಎ -5 ವಿಸ್ತರಣೆ ಸಮಯ

Extension ಚಿಕ್ಕ ವಿಸ್ತರಣೆ ಸಮಯ —— ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಸಮಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ.

ಪ್ರ: ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ

ವಿದ್ಯಮಾನ: samplesಣಾತ್ಮಕ ಮಾದರಿಗಳು ಕೂಡ ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.

ಎ -1 ಪಿಸಿಆರ್ ಮಾಲಿನ್ಯ

Target ಗುರಿಯ ಅನುಕ್ರಮ ಅಥವಾ ವರ್ಧನೆಯ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಅಡ್ಡ ಮಾಲಿನ್ಯ -— ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ನೆಗೆಟಿವ್ ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ನಲ್ಲಿ ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್ ಹೊಂದಿರುವ ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಅನ್ನು ಪೈಪ್ ಮಾಡಬೇಡಿ ಅಥವಾ ಅವುಗಳನ್ನು ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್ ನಿಂದ ಚೆಲ್ಲಬೇಡಿ. ಕಾರಕಗಳು ಅಥವಾ ಸಲಕರಣೆಗಳನ್ನು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ತೊಡೆದುಹಾಕಲು ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಬೇಕು ಮತ್ತು ಮಾಲಿನ್ಯದ ಅಸ್ತಿತ್ವವನ್ನು ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಧರಿಸಬೇಕು.

Ag ಕಾರಕ ಮಾಲಿನ್ಯ --— ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.

ಎ -2 ಪ್ರಧಾನr

ಎಂಜಿ²⁺ ಏಕಾಗ್ರತೆ ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆ —— Mg ಅನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ²⁺ ಏಕಾಗ್ರತೆ: Mg ಅನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಿ²⁺ ಸೂಕ್ತ ಎಮ್‌ಜಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲು 0.5 ಎಂಎಂ ಮಧ್ಯಂತರದೊಂದಿಗೆ 1 ಎಮ್‌ಎಮ್‌ನಿಂದ 3 ಎಂಎಮ್‌ವರೆಗಿನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸರಣಿಯಿಂದ ಏಕಾಗ್ರತೆ²⁺ ಪ್ರತಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗೆ ಏಕಾಗ್ರತೆ.

Pri ಅಸಮರ್ಪಕ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ, ಮತ್ತು ಉದ್ದೇಶಿತ ಅನುಕ್ರಮವು ಗುರಿಯಲ್ಲದ ಅನುಕ್ರಮದೊಂದಿಗೆ ಹೋಮಾಲಜಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. —— ಮರು-ವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು.

ಪ್ರ: ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆ

ವಿದ್ಯಮಾನ: ಪಿಸಿಆರ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳು ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಗಾತ್ರಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ದೊಡ್ಡದು ಅಥವಾ ಚಿಕ್ಕದು, ಅಥವಾ ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳು ಸಂಭವಿಸುತ್ತವೆ.

ಎ -1 ಪ್ರೈಮರ್

Pri ಕಳಪೆ ಪ್ರೈಮರ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ

—— ಮರು-ವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರೈಮರ್.

Pri ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ —— ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ ಮತ್ತು ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಸಮಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ.

A-2 Mg²⁺ ಏಕಾಗ್ರತೆ

M ದಿ ಎಂಜಿ²⁺ ಏಕಾಗ್ರತೆ ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ —— Mg2+ ಏಕಾಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ: Mg ಅನ್ನು ಉತ್ತಮಗೊಳಿಸಿ²⁺ ಸೂಕ್ತ ಎಮ್‌ಜಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲು 0.5 ಎಂಎಂ ಮಧ್ಯಂತರದೊಂದಿಗೆ 1 ಎಮ್‌ಎಮ್‌ನಿಂದ 3 ಎಂಎಮ್‌ವರೆಗಿನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸರಣಿಯಿಂದ ಏಕಾಗ್ರತೆ²⁺ ಪ್ರತಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗೆ ಏಕಾಗ್ರತೆ.

ಎ -3 ಥರ್ಮೋಸ್ಟೇಬಲ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್

En ಅತಿಯಾದ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ —— 0.5 ಕಿ ಯ ಅಂತರದಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.

ಎ -4 ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ

Ne ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ——ಅನೀಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ ಅಥವಾ ಎರಡು ಹಂತದ ಅನೀಲಿಂಗ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ

ಎ -5 ಪಿಸಿಆರ್ ಚಕ್ರಗಳು

P ಹಲವಾರು ಪಿಸಿಆರ್ ಆವರ್ತಗಳು —— ಪಿಸಿಆರ್ ಆವರ್ತಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.

ಪ್ರ: ತೇಪೆ ಅಥವಾ ಸ್ಮೀಯರ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳು

ಎ -1 ಪ್ರೈಮರ್—— ಕಳಪೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ —— ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಮರು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿ, ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಸ್ಥಾನವನ್ನು ಮತ್ತು ಉದ್ದವನ್ನು ಅದರ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಬದಲಾಯಿಸಿ; ಅಥವಾ ನೆಸ್ಟೆಡ್ ಪಿಸಿಆರ್ ನಿರ್ವಹಿಸಿ.

A-2 ಟೆಂಪ್ಲೇಟು DNA

—— ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಶುದ್ಧವಲ್ಲ —— ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿ ಅಥವಾ ಡಿಎನ್ಎಯನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಿಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯಿರಿ.

A-3 Mg²⁺ ಏಕಾಗ್ರತೆ

——Mg²⁺ ಏಕಾಗ್ರತೆ ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ —— Mg ಅನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ²⁺ ಏಕಾಗ್ರತೆ: Mg ಅನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಿ²⁺ ಸೂಕ್ತ ಎಮ್‌ಜಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲು 0.5 ಎಂಎಂ ಮಧ್ಯಂತರದೊಂದಿಗೆ 1 ಎಮ್‌ಎಮ್‌ನಿಂದ 3 ಎಂಎಮ್‌ವರೆಗಿನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸರಣಿಯಿಂದ ಏಕಾಗ್ರತೆ²⁺ ಪ್ರತಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗೆ ಏಕಾಗ್ರತೆ.

A-4 dNTP

——DNTP ಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ —— dNTP ಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ

ಎ -5 ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ

—— ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ ——ಅನೀಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ

ಎ -6 ಚಕ್ರಗಳು

—— ಹಲವು ಚಕ್ರಗಳು —— ಸೈಕಲ್ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಉತ್ತಮಗೊಳಿಸಿ

ಪ್ರಶ್ನೆ: 50 μl ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಎಷ್ಟು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್ಎ ಸೇರಿಸಬೇಕು?

ಪ್ರ: ಉದ್ದವಾದ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸುವುದು ಹೇಗೆ?

ಸೂಕ್ತವಾದ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವುದು ಮೊದಲ ಹಂತವಾಗಿದೆ. 3'-5 'ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಕೊರತೆಯಿಂದಾಗಿ ನಿಯಮಿತ ಟಕ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಪ್ರೂಫ್ ರೀಡ್ ಮಾಡಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಅಸಾಮರಸ್ಯವು ತುಣುಕುಗಳ ವಿಸ್ತರಣೆ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ನಿಯಮಿತ ಟಕ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ 5 ಕೆಬಿಗಿಂತ ದೊಡ್ಡದಾದ ಗುರಿ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ. ವಿಶೇಷ ಮಾರ್ಪಾಡು ಅಥವಾ ಇತರ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಷ್ಠೆಯ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಟಾಕ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ವಿಸ್ತರಣೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಮತ್ತು ಉದ್ದವಾದ ತುಣುಕಿನ ವರ್ಧನೆಯ ಅಗತ್ಯತೆಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸಲು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಬೇಕು. ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಉದ್ದವಾದ ತುಣುಕುಗಳ ವರ್ಧನೆಗೆ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ, ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಸಮಯ, ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಸಮಯ, ಬಫರ್ ಪಿಹೆಚ್ ಇತ್ಯಾದಿಗಳ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, 18-24 ಬಿಪಿ ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಉತ್ತಮ ಇಳುವರಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು. ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಹಾನಿಯನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು, 94 ° C ನಲ್ಲಿ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಸಮಯವನ್ನು 30 ಸೆಕೆಂಡಿಗೆ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರತಿ ಚಕ್ರಕ್ಕೆ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬೇಕು, ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆಗೆ ಮೊದಲು ತಾಪಮಾನವನ್ನು 94 ° C ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಸಮಯವು 1 ನಿಮಿಷಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಇರಬೇಕು. ಇದಲ್ಲದೆ, ವಿಸ್ತರಣೆಯ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸುಮಾರು 68 ° C ಗೆ ಹೊಂದಿಸುವುದು ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಸಮಯವನ್ನು 1 kb/min ದರಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸುವುದರಿಂದ ದೀರ್ಘ ತುಣುಕುಗಳ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಖಾತ್ರಿಪಡಿಸಬಹುದು.

ಪ್ರಶ್ನೆ: ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ವರ್ಧನೆಯ ನಿಷ್ಠೆಯನ್ನು ಹೇಗೆ ಸುಧಾರಿಸುವುದು?

ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಷ್ಠೆಯೊಂದಿಗೆ ವಿವಿಧ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ದೋಷದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು. ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ ಕಂಡುಬಂದಿರುವ ಎಲ್ಲಾ ತಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, ಪಿಎಫ್‌ಯು ಕಿಣ್ವವು ಕಡಿಮೆ ದೋಷದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಷ್ಠೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (ಲಗತ್ತಿಸಲಾದ ಕೋಷ್ಟಕವನ್ನು ನೋಡಿ). ಕಿಣ್ವದ ಆಯ್ಕೆಯ ಜೊತೆಗೆ, ಸಂಶೋಧಕರು ಪಿಸಿಆರ್ ಮ್ಯುಟೇಶನ್ ದರವನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು, ಬಫರ್ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸುವುದು, ಥರ್ಮೋಸ್ಟೇಬಲ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಸೈಕಲ್ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಉತ್ತಮಗೊಳಿಸುವುದು.

ನಿಮ್ಮ ಸಂದೇಶವನ್ನು ಇಲ್ಲಿ ಬರೆದು ನಮಗೆ ಕಳುಹಿಸಿ

ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ವರ್ಗಗಳು

ನಮ್ಮನ್ನು ಏಕೆ ಆರಿಸಬೇಕು

ಸ್ಥಾಪನೆಯಾದಾಗಿನಿಂದ, ನಮ್ಮ ಕಾರ್ಖಾನೆಯು ತತ್ವವನ್ನು ಅನುಸರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮೊದಲ ವಿಶ್ವ ದರ್ಜೆಯ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುತ್ತಿದೆ
ಮೊದಲು ಗುಣಮಟ್ಟದ. ನಮ್ಮ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಉದ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಖ್ಯಾತಿಯನ್ನು ಗಳಿಸಿವೆ ಮತ್ತು ಹೊಸ ಮತ್ತು ಹಳೆಯ ಗ್ರಾಹಕರಲ್ಲಿ ಮೌಲ್ಯಯುತವಾದ ವಿಶ್ವಾಸವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ.

ವಿಚಾರಣೆ