RNAprep ಶುದ್ಧ ಮೈಕ್ರೋ ಕಿಟ್

ಎ -1 ಸೆಲ್ ಲೈಸಿಸ್ ಅಥವಾ ಏಕರೂಪೀಕರಣವು ಸಾಕಾಗುವುದಿಲ್ಲ

---- ಮಾದರಿ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ, ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ, ಏಕರೂಪೀಕರಣ ಮತ್ತು ಲೈಸಿಸ್ ಸಮಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ.

ಎ -2 ಮಾದರಿ ಮೊತ್ತವು ತುಂಬಾ ದೊಡ್ಡದಾಗಿದೆ

---- ಬಳಸಿದ ಮಾದರಿಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ ಅಥವಾ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ.

A-1 ಜೀವಕೋಶದ ಲೈಸಿಸ್ ಅಥವಾ ಏಕರೂಪೀಕರಣ

---- ಮಾದರಿ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ, ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ, ಏಕರೂಪೀಕರಣ ಮತ್ತು ಲೈಸಿಸ್ ಸಮಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ.

ಎ -2 ಮಾದರಿ ಮೊತ್ತವು ತುಂಬಾ ದೊಡ್ಡದಾಗಿದೆ

---- ದಯವಿಟ್ಟು ಗರಿಷ್ಠ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ನೋಡಿ.

A-3 RNA ಅನ್ನು ಅಂಕಣದಿಂದ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಹೊರಹಾಕಲಾಗಿಲ್ಲ

---- RNase-Free ನೀರನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ, ಅದನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಯಾಗುವ ಮೊದಲು ಕೆಲವು ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಡಿ.

ಎ -4 ಎಥೆನಾಲ್ ಎಲುಯೆಂಟ್‌ನಲ್ಲಿ

---- ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ, ಮತ್ತೊಮ್ಮೆ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮತ್ತು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ತೊಳೆಯುವ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ.

ಎ -5 ಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗಿಲ್ಲ

---- ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸುವಾಗ, ದಯವಿಟ್ಟು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವುದನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

A-6 RNAstore ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹವಾಗಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತವಾಗಿಲ್ಲ

---- ಆರ್ಎನ್ಎ ಸ್ಟೋರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಸರಾಸರಿ ಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ; ಆದ್ದರಿಂದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಬಲವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬೇಕು. 3000x g ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗಿದೆ.

A-7 ಕಡಿಮೆ RNA ವಿಷಯ ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಸಮೃದ್ಧಿ

---- ಮಾದರಿಯಿಂದ ಕಡಿಮೆ ಇಳುವರಿ ಉಂಟಾಗಿದೆಯೇ ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಧನಾತ್ಮಕ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಳಸಿ.

ಎ -1 ವಸ್ತು ತಾಜಾ ಅಲ್ಲ

---- ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ತಾಜಾ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ತಕ್ಷಣವೇ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ಶೇಖರಿಸಿಡಬೇಕು ಅಥವಾ ತಕ್ಷಣವೇ RNAstore ಕಾರಕಕ್ಕೆ ಹಾಕಬೇಕು.

ಎ -2 ಮಾದರಿ ಮೊತ್ತವು ತುಂಬಾ ದೊಡ್ಡದಾಗಿದೆ

---- ಮಾದರಿ ಮೊತ್ತವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.

A-3 RNase ಮಾಲಿನ್ಯn

---- ಕಿಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಒದಗಿಸಿದ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ಆರ್‌ನೇಸ್ ಇರುವುದಿಲ್ಲವಾದರೂ, ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಆರ್‌ನೇಸ್ ಅನ್ನು ಕಲುಷಿತಗೊಳಿಸುವುದು ಸುಲಭ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ನಿರ್ವಹಿಸಬೇಕು.

ಎ -4 ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಮಾಲಿನ್ಯ

---- ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಬದಲಿಸಿ ಮತ್ತು ಉಪಭೋಗ್ಯ ವಸ್ತುಗಳು ಮತ್ತು ಲೋಡಿಂಗ್ ಬಫರ್ RNase ಮಾಲಿನ್ಯದಿಂದ ಮುಕ್ತವಾಗಿದೆಯೇ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

ಎ -5 ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ಗಾಗಿ ತುಂಬಾ ಲೋಡಿಂಗ್

---- ಮಾದರಿ ಲೋಡಿಂಗ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ, ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಯ ಲೋಡಿಂಗ್ 2 μg ಮೀರಬಾರದು.

A-1 ಮಾದರಿ ಮೊತ್ತವು ತುಂಬಾ ದೊಡ್ಡದಾಗಿದೆ

---- ಮಾದರಿ ಮೊತ್ತವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.

A-2 ಕೆಲವು ಮಾದರಿಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ DNA ಅಂಶವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಮತ್ತು DNase ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಬಹುದು.

---- ಪಡೆದ RNA ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ RNase-Free DNase ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ಮಾಡಿ, ಮತ್ತು RNA ಅನ್ನು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ ಮುಂದಿನ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ನೇರವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು, ಅಥವಾ RNA ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಿಟ್‌ಗಳಿಂದ ಮತ್ತಷ್ಟು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಬಹುದು.

ಗಾಜಿನ ಸಾಮಾನುಗಳಿಗಾಗಿ, 150 ° C ನಲ್ಲಿ 4 ಗಂಟೆಗೆ ಬೇಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ಲಾಸ್ಟಿಕ್ ಪಾತ್ರೆಗಳಿಗಾಗಿ, 0.5 M NaOH ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಮುಳುಗಿಸಿ, ನಂತರ RNase ಮುಕ್ತ ನೀರಿನಿಂದ ಚೆನ್ನಾಗಿ ತೊಳೆಯಿರಿ ಮತ್ತು ನಂತರ RNase ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಕ್ರಿಮಿನಾಶಗೊಳಿಸಿ. ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ಬಳಸಿದ ಕಾರಕಗಳು ಅಥವಾ ಪರಿಹಾರಗಳು, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ನೀರು, ಆರ್‌ನೇಸ್‌ನಿಂದ ಮುಕ್ತವಾಗಿರಬೇಕು. ಎಲ್ಲಾ ಕಾರಕ ಸಿದ್ಧತೆಗಳಿಗಾಗಿ RNase ಮುಕ್ತ ನೀರನ್ನು ಬಳಸಿ (ಶುದ್ಧ ಗಾಜಿನ ಬಾಟಲಿಗೆ ನೀರನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, DEPC ಯನ್ನು 0.1% (V/V) ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಸೇರಿಸಿ, ರಾತ್ರಿಯಿಡೀ ಅಲುಗಾಡಿಸಿ ಮತ್ತು ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಿ).